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轻松开启流式实验关键一步——抗体选择
人阅读 发布时间：2022-11-08 18:39
抗体作为细胞生物学和生物化学中最重要的试剂之一，科学界每年在这类试剂上的花费约达20亿美元[1]。但是我们经常会听到一些令人沮丧的结果---抗体不起作用，实验结果无法重复。
抗体的不可靠性给生物学研究（包括癌症，代谢，免疫学等）带来巨大的损失，尤其是流式实验过程，抗体的选择极其重要，可重复性差，特异性不足，批间差异性等均可导致错误结果和大量时间的浪费。但近年来，生物界对实验的可重复性越来越关注，传统抗体存在的问题凸显出来：
重组抗体不同于传统抗体，无需通过动物源性的样本制备，由改造后的抗体基因序列直接在哺乳动物细胞中表达，细胞培养均在标准化，无血清的环境中进行。抗体的生产均在遗传背景完全相同的细胞系中表达，极大避免了表达系统不同而带来的抗体批次间质量差异性。
美天旎 REAfinityTM 重组抗体——为流式而生
什么是 REAfinity 抗体？
REAfinity 抗体是一种重组基因工程改造抗体，是将传统的小鼠或大鼠杂交瘤来源的单克隆抗体的抗原结合区（Fab）与经过突变的人 IgG1 的恒定区（Fc）进行基因重组而成。
为什么说 REAfinity抗体是为流式而生？
图2：对抗体进行质谱分析，数据表明：REAfinity抗体纯度非常高，而杂交瘤来源的抗体是一种混合物。(A)对两个杂交瘤来源的单克隆抗体样本进行质谱分析，可以看出，它们都含有一条分子量接近23,635Da的污染轻链。(B)两个REAfinity抗体样本的质谱分析结果显示，其含有极高纯度的轻链。
图3：使用REAfinity抗体时，只需一种通用型同型对照，降低了实验设计的复杂程度
参考文献：
[1]Goodman SL. The antibody horror show: an introductory guide for the perplexed. N Biotechnol. 2018 Oct 25;45:9-13. doi: 10.1016/j.nbt.2018.01.006. Epub 2018 Feb 3. PMID: 29355666.
[2]Bradbury, A., Plückthun, A. Reproducibility: Standardize antibodies used in research. Nature 518, 27–29 (2015). https://doi.org/10.1038/518027a.
抗体的不可靠性给生物学研究（包括癌症，代谢，免疫学等）带来巨大的损失，尤其是流式实验过程，抗体的选择极其重要，可重复性差，特异性不足，批间差异性等均可导致错误结果和大量时间的浪费。但近年来，生物界对实验的可重复性越来越关注，传统抗体存在的问题凸显出来：
- 每使用一管新抗体都需要进行滴定测试，做不好还浪费抗体；
- 那么多种同型对照，是人是鼠傻傻分不清楚；
- 步骤复杂，一旦忘记加 Fc 阻断试剂，一切从头来过；
- 抗体不佳，阳性细胞群不明显，但样品珍贵，实验就地搁置；
- ……
重组抗体不同于传统抗体，无需通过动物源性的样本制备，由改造后的抗体基因序列直接在哺乳动物细胞中表达，细胞培养均在标准化，无血清的环境中进行。抗体的生产均在遗传背景完全相同的细胞系中表达，极大避免了表达系统不同而带来的抗体批次间质量差异性。
美天旎 REAfinityTM 重组抗体——为流式而生
什么是 REAfinity 抗体？
REAfinity 抗体是一种重组基因工程改造抗体，是将传统的小鼠或大鼠杂交瘤来源的单克隆抗体的抗原结合区（Fab）与经过突变的人 IgG1 的恒定区（Fc）进行基因重组而成。
为什么说 REAfinity抗体是为流式而生？
- 1）批次间稳定一致
图2：对抗体进行质谱分析，数据表明：REAfinity抗体纯度非常高，而杂交瘤来源的抗体是一种混合物。(A)对两个杂交瘤来源的单克隆抗体样本进行质谱分析，可以看出，它们都含有一条分子量接近23,635Da的污染轻链。(B)两个REAfinity抗体样本的质谱分析结果显示，其含有极高纯度的轻链。
- 2）通用型同型对照
图3：使用REAfinity抗体时，只需一种通用型同型对照，降低了实验设计的复杂程度
- 3）无需Fc受体阻断
- 4）优选序列，染色指数高
参考文献：
[1]Goodman SL. The antibody horror show: an introductory guide for the perplexed. N Biotechnol. 2018 Oct 25;45:9-13. doi: 10.1016/j.nbt.2018.01.006. Epub 2018 Feb 3. PMID: 29355666.
[2]Bradbury, A., Plückthun, A. Reproducibility: Standardize antibodies used in research. Nature 518, 27–29 (2015). https://doi.org/10.1038/518027a.
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