小伙伴们，有一个重磅消息听说了吗？六月初，造血干细胞研究与临床应用迎来了两个重大突破。

一是欧盟批准基因治疗与干细胞治疗双剑合璧，来修复地中海贫血患者的造血干细胞缺陷。此项政策的批准给血液疾病患者提供了新的可治愈途径。
另一个重大突破是科学家通过改变培养基配方，实现造血干细胞可体外千倍扩增。由此便可长期在体外稳定培养造血干细胞，为临床应用提供无论是自体或异体来源的种子细胞来源。 
造血干细胞 (Hematopoietic stem cells, HSCs) 研究一直是干细胞领域中的圣杯，这两项重大进展，给科学家们带来了无穷的希望。

造血干细胞（CD34 + 细胞）是血液系统中的成体干细胞，可发育成所有血液细胞及各种免疫细胞；同时还具有强大的自我更新能力。然而血液系统中的成熟细胞寿命极短；在人的一生中，HSC 需时时进行扩增与分化，才能保障人体的正常生理功能。因此造血干细胞的可塑性 (HSC plasticity) 一直是学界研究的热门领域。
此外临床上，移植造血干细胞 (HSC) 已成为一项重要的治疗手段，广泛应用于血液系统疾病以及自身免疫疾病，甚至实体瘤的治疗中；如白血病、镰状细胞性贫血、红斑性狼疮、肿瘤放射化疗等。临床标准输入量为 20x10⁴ cells/kg；即一个 50 kg 重的人，若要进行造血干细胞移植，需要 10⁷ HSCs。可以通过自储微量健康的造血干细胞 (如脐血库) 进行体外扩增后，用于造血移植、成份输血、基因治疗以及细胞组织工程，进行细胞治疗对抗顽强血液疾病或自身免疫炎症 。

除了可通过 iPSC 诱导分化 HSC，目前自体来源的 HSC 可在骨髓 (bone marrow) 、外周血 (peripheral blood) 、脐血 (cord blood) 提取 CD34 蛋白阳性的造血干细胞 (CD34+ cells)，但提取量非常有限。

因此如何富集 CD34 + 细胞，甚至在体外扩增达到移植细胞数量是当前极具挑战的研究课题。

实验方案概览

01 分离单个核细胞 (Isolation of mononuclear cells)

依据不同来源骨髓 (BM)、外周血 (PBMC)、脐血 (CB) 组织，藉由梯度密度离心方法分离单个核细胞 (mononuclear cells, MNCs) 。
02 分离富集 CD34 + 细胞 (Isolation of CD34+ cells)

利用 Miltenyi Biotec CD34 MicroBead Kit 分离 CD34+ 细胞。

1. 磁珠标记 (Magnetic labeling)

分离后的单个核细胞与 FcR Blocking Reagent 及 CD34 MicroBeads UltraPure 在 2~8 °C 孵育 30 分钟。清洗细胞并离心去除多余未标记的磁珠，重悬细胞质适当的体积 (ex. 10⁸ cells in 500 µL of buffer）
 
2. 磁珠分选（Magnetic separation）

根据总细胞数和 CD34 + 细胞，选择合适的 MACS 管柱和 MACS 分离器。CD34 MicroBeads 孵育后的细胞混合液通过管柱，CD34 + 细胞被管柱中的磁珠吸附；而非 CD34 + 细胞则流出管柱。经过几次清洗，流穿液可获得更高纯度的 CD34 + 细胞。
3.HSC 纯度评估 (Evaluation of HSC Purity)

分离的 CD34 + 细胞的纯度可以通过流式细胞仪 (美天旎 MACSQuant) 或荧光显微镜评估。通过磁珠分选，CD34+ cell 明显被富集（图五）。为临床应用，Miltenyi Biotec 提供欧盟认证的 ClinicMACS CD34 system 用以分离用于富集来自人异源血液细胞群的 CD34 + 细胞（图六）。