肿瘤免疫治疗新方向：CAR-NK

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NK 细胞是免疫系统第一道防线，可非特异性直接杀伤肿瘤细胞，不需要抗原致敏，也不需要抗体参与，NK 细胞单独就能识别和攻击外来细胞、癌细胞和病毒。异体 NK 细胞的抗肿瘤活性在造血干细胞移植治疗血液恶性肿瘤中已得到证实。相对于 T 细胞，供体 NK 细胞可以促进移植、抗感染和控制癌症复发，而不会引起移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗肿瘤（GVT）效应。因此，NK 细胞在免疫细胞治疗中有着良好的应用前景。除目前火热的 CAR-T 细胞治疗，同时不断地有 CAR-NK 细胞治疗发展应用。


如何激活 NK 细胞？！

在循环系统中的 NK 细胞通常处于休眠状态，一旦被激活，它们会渗透到组织中，分泌穿孔素及肿瘤坏死因子，攻击肿瘤细胞和病毒感染细胞。而这「动态平衡」主要受 NK 细胞表面受体蛋白的调控：杀伤细胞活化受体（KAR）和杀伤细胞抑制受体（KIR）。NK 细胞的活化状态，执行细胞的脱粒、细胞因子释放和细胞杀伤功能是抑制信号和活化信号综合的结果。
 


NK 细胞如何应用于肿瘤免疫治疗发挥疗效？！

✦解除 NK 细胞的抑制信号以活化 NK 细胞
✦使用嵌合抗原受体 (CAR) 技术
✦利用肿瘤专一性抗体介导细胞毒杀作用 (ADCC)
✦使用双特性抗体/分子联结 NK 细胞活化受体和肿瘤表面
目前 CAR-T 治疗多倾向于自体细胞移植，但生产个体病人自体的细胞产品过程繁琐耗时，且限制了广泛的临床应用。此外,CAR-T 对于大量预处理的（heavily pre-treated）高风险淋巴癌患者无法提供临床相应剂量供治疗。

CAR-NK 的优势：

✦异体 NK 细胞不会引起移植物抗宿主病（GVHD）；✦NK 细胞治疗不分泌炎症因子 (IL1，IL6) 致使细胞因子释放综合症发生；✦NK 细胞具备更多的肿瘤杀伤途径，如执行细胞脱粒、激活凋亡途径和介导 ADCC 功能 (NK 细胞研究，正当红 & 抗体药介导 NK 细胞 ADCC)；✦异体 NK 细胞来源广泛，包括外周血，脐带血，NK 细胞株 (NK-92) 与诱导多能干细胞 (iPSC-NK) 等；✦NK 细胞在体内存活周期短，不同 CAR-T 细胞滞留期长易产生副作用攻击患者细胞；✦对实体肿瘤治疗具有明显优势，因为实体肿瘤对非修饰的 NK 细胞会表现出不同程   度的耐受性，但却对抗原依赖型的 NK 细胞敏感。

 
NK 细胞分离与富集

NK 细胞培养扩增

CAR-NK 病毒转染

构建 CAR-NK 是为通过基因编辑新建一条活化 NK 细胞的激活通路并增强其抗肿瘤效应，且兼具靶向性 (如 CD19, CD20)。基因的稳定转染是实现 NK 细胞稳定表达 CAR 的前提。NK 细胞使用传统的电穿孔法和脂质体转染效率低下，因此多数使用逆转录病毒和慢病毒载体。

Vectofusin-1^® 为合成、可溶解、无毒性的胜肽，可加强逆转录病毒和慢病毒载体转染效率。 NK 细胞表型与功能性分析

美天旎提供一系列标记ＮＫ细胞抗体, MACSPlex Cytokine kits 与 Cytotoxic T/NK cell kit 进行ＮＫ细胞功能鉴定。

CAR-NK 的临床转化

CAR-NK 临床研究进展明显，至今已有多项免疫细胞治疗应用于恶性血液疾病与实体肿瘤的临床试验已开展。CAR-NK 制备工艺复杂，过程中的无菌操作、细胞纯度、制备成品安全性等质量控制对后期的疗效有着重要影响，所以确保生产过程的标准化和自动化，做到药效和风险可控是首要任务。因此 CliniMACS Prodigy GMP 级细胞处理平台，将是目前 CAR-NK 细胞制备不可或缺的自动化系统。美天旎未来将提供完整性的 CAR-NK 自动化制备流程，为免疫细胞治疗提供可靠安全的制备平台。
 

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